玉米Mutator转座子

Mutator转座子因其拷贝数高、正向突变频率高、倾向于插入低拷贝的DNA序列等独特的遗传特性，已成为基因组学研究中重要的诱变剂之一。本文对Mutator转座子的发现、Mutator家族的分类、Mutator转座子的特性、Mutator元件的表观调控、Mutator转座子标签在植物基因组学研究中的应用作了综述。对Mutator系统的研究进行了展望。     

稳定转化家蚕BmN细胞表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

为了建立稳定转化家蚕细胞持续表达外源基因的技术体系,构建了基于piggyBac转座子的带有人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(hGM-CSF)和新霉素抗性基因(neo)表达元件的转基因载体pigA3GFP-IE-neo-FH-hGM-CSF-polyA-fib-L-intron1,以及带有hGM-CSF和吉欧霉素(zeocin)抗性基因的昆虫细胞转化载体pIZT-IE-hGM-CSF,分别转染家蚕卵巢BmN细胞,并以含相应抗生素G418或zeocin的培养液筛选,得到稳定的转化细胞系FH-hGM-CSF和IE-hGM-CSF。ELISA检测结果显示,hGM-CSF在FH-hGM-CSF和IE-hGM-CSF转化细胞系的表达水平分别为1.534 55 fg/个细胞和2.227 38 fg/个细胞。     

玉米Mutator转座子结构特征和基因克隆的研究进展

Mutator（Mu）转座子是已发现的植物中转座活性最强的转座子,其较高的转座频率以及趋向于插入单拷贝功能基因转座的特性,使其成为构建玉米突变体库的一个主要方法。当前玉米B73品系基因组测序已经基本完成,利用反向遗传学方法,研究玉米基因的功能更为方便。文中简要介绍Mu转座子的结构特征以及Mu的分类,介绍3种克隆Mu转座子标签插入位点侧翼序列的技术,对Mu研究所存在的问题进行分析,展望Mu的应用。     

Ac/Ds转座子及其作为插入序列标签的应用

简要介绍了Ac/Ds转座子作为插入序列标签的构建形式及其在植物基因组中的插入特点、影响Ds转座子跳跃的因素,并且对其在植物功能基因组的发展前景作了分析。     

Characterization of nonautonomous Tc1-like transposable elements of channel catfish (Ictalurus punctatus)

Putative nonautonomous transposable elements from channel catfish (Ictalurus punctatus) were identified. They were named Tipnon elements for Tc1-like transposable elements from channel catfish that are nonautonomous. These elements were defined by their terminal repeats that share identity to members of the known Tc1/mariner transposon superfamily. They show structural similarities to Tc1-like elements, but share little sequence identity beyond the terminal inverted repeats. They do not harbor any amino acid blocks that show similarities to the Tc1-like or other transposases and thus may represent truly nonautonomous transposons in channel catfish. They are abundant in the channel catfish genome with a copy number of 32000, having 500 base pair per copy, this family of nonautonomous transposon-like elements account for 1.6% of the channel catfish genomic DNA. Their high abundance and transposon-like terminal repeats indicate that they may play important roles in gene evolution and in genomic architecture of catfish. Similarity search for potential coding capacity of the Tipnon elements revealed that they contain sequence blocks that can potentially encode amino acid blocks similar to the para-type sodium channel proteins in cockroaches or house flies, proteins that function in the central nervous system as voltage-gated sodium transporters. Sequences surrounding the terminal inverted repeats are divergent from those used by the reconstructed Sleeping Beauty fish transposase.     

植物转座子在基因克隆中的应用

本文系统介绍了目前中转座子的种类,结构特征和在基因转化,基因克隆等方面的应用新进展,同时也详细介绍了类copia逆转座子在水稻上的应用研究。     

热不对称PCR(TAIL-PCR)和Tn5转座子质粒拯救法快速分离水稻条斑病菌致病相关基因

构建植物病原菌突变体库是进行新基因发掘和功能基因组学研究的有效途径之一.为快速准确地鉴定Tn5的插入位点和相应的功能基因,研究采用热不对称PCR(TAIL-PCR)和Tn5转座子质粒拯救两种技术,鉴别了在筛选水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)Tn5插入突变体库过程中获得的8个在水稻(Oryza sativa)上毒性减弱的突变体.结果显示,TAIL-PCR和Tn5质粒拯救结合使用,可有效地鉴别Tn5的插入位点和相应的功能基因.TAIL-PCR鉴别的5株突变体是Tn5分别插入在分泌系统结构蛋白F基因(gspF)、cAMP调控蛋白、膜镶嵌蛋白酶酶原、S-蛋硫氨酸脱羧酶亚基和gspJ基因上;Tn5质粒拯救法鉴别的3株突变体是Tn5分别插入在致病性蛋白、功能未知的保守蛋白和鞭毛特异性ATP合酶基因上.序列同源性分析发现,8株突变体Tn5插入的基因与基因组测序的BLS256菌株中的对应基因同一性达100%.这表明,TAIL-PCR和Tn5质粒拯救技术可有效地应用于植物病原菌Tn5突变体库的鉴别和目标基因的分离.     

超氧化物歧化酶与苏云金芽胞杆菌高温诱导产黑色素相关

为探讨苏云金芽胞杆菌高温诱导产黑色素机制,利用含mini-Tn10转座子载体pIC333构建苏云金芽胞杆菌油松亚种4CA1,随机插入突变体库,以寻找相关调控基因。通过高温诱导筛选得到1株在42℃产黑色素减弱的菌株;克隆得到mini-Tn10中断基因的部分序列,通过测序及同源性比对分析,确定中断基因为超氧化物歧化酶基因sodA2。     

GFP标记的短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）转座突变株的构建初探

以水稻叶面附生菌短小芽孢杆菌(B.pumilus)为研究对象,通过构建pMOD-egfp-Tetr转座复合体,采用电击转化法对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的转化子。对转化子进行了遗传稳定性分析和分子鉴定,并且在荧光显微镜下观察到了强烈的绿色荧光,研究结果表明外源DNA已经成功整合进细菌的基因组中,gfp基因在短小芽孢杆菌中实现了组成型表达。     

在水稻突变体中分离逆转座子初报

利用水稻双子房突变体为材料，设计简并引物，扩增类copia逆转座子中最保守的RT区域，得到了3个克隆片段。序列测定表明，其中1个克隆片段中含有终止码，另外2个克隆片段分别命名为PR1和PR4，均为连续的编码区。与已知的其他逆转座子序列的比较及聚类分析表明，PR1和其他序列差异很大，自成一类；PR4与Rrt21关系最近，相同率高达95．1％，属于同一个家族。同26个水稻品种的杂交结果表明，PR1的拷贝数变化不大，而PR4则存在着广泛的多态性，暗示着可能有转座功能。